液相色谱的基本原理

色谱法是一组用于分离混合物的技术的统称。这些技术包括气相色谱 (GC)、薄层色谱 (TLC)、尺寸排阻色谱(SEC) 和高效液相色谱 (HPLC)。
 
两个阶段
色谱法涉及将溶解在“流动相”中的混合物通过“固定相”。流动相通常是液体或气体,其将待分离的混合物输送通过具有固体固定相的柱或平板。
 
液相色谱
液相色谱 (LC) 是一种分离技术,其中流动相为液体。它可以在列或平面中进行。LC 特别适用于分离溶解在溶剂中的离子或分子。
 
简单的液相色谱由一个带有多孔底部的柱子组成,该柱子将固定相与溶剂保持平衡。常用的固定相包括固体、树脂上的离子基团、惰性固体载体上的液体和多孔惰性颗粒。将要分离的混合物加载到柱顶,然后加入更多溶剂。由于流动液相和固定相之间的分配行为不同,混合物中的不同组分以不同的速率通过色谱柱。
 
液相色谱比其他方法(如气相色谱)使用更广泛,因为分析的样品不需要蒸发。此外,与其他类型的色谱不同,温度变化在液相色谱中的影响可以忽略不计。
 
高效液相色谱 (HPLC)
目前,通常使用微小填料颗粒和相当高的压力的液相色谱被称为 HPLC。它基本上是一种高度改进的柱层析形式,生物化学家经常使用它来分离氨基酸和蛋白质,因为它们在溶剂中的不同行为与每种物质的电荷量有关。
 
溶剂被允许在重力作用下通过柱子,而是在高达 400 个大气压的高压下强制通过,从而使过程更快。因为使用较小的颗粒,它们的尺寸由粒度分析仪确定,固定相和流过它的分子之间的相互作用有更大的表面积。这反过来又允许更好地分离混合物中的组分。
 
HPLC 有许多优点。首先,这是一个自动化过程,只需几分钟即可产生结果。这是液相色谱的一大进步,液相色谱使用重力而不是高速泵来迫使组件通过密集填充的管道。HPLC 产生的结果具有高分辨率且易于阅读。此外,测试很容易通过自动化过程重现。
 
不幸的是,这种技术也有缺点。很难用 HPLC 检测共流出,这可能会导致化合物分类不准确。进行 HPLC 所需的设备也更昂贵,并且其操作可能很复杂。
 
由于技术的快速进步,HPLC 等分析仪器越来越受欢迎。在大多数情况下,这些技术的效率超过了它们的缺点,使它们成为流行的选择,尤其是在制药和医药行业。

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