如何选择HPLC色谱柱?

什么是高效液相色谱?

高效液相色谱 (HPLC) 是当今用于在高压下分离混合物的方法。通常,将带有合适溶剂(流动相)的样品注入填充有填充颗粒(固定相)的 HPLC 柱中。当流动相通过色谱柱时,样品中的每种成分在不同的时间开始分离和洗脱。 

如何为您的工作选择合适的 HPLC 色谱柱?

许多因素影响 HPLC 中的色谱柱选择,包括:

  1. HPLC 色谱柱的类型
  2. 长度和内径
  3. 珠子尺寸
  4. 毛孔大小

在这里,我们将更详细地解释每个因素如何影响您的 HPLC 色谱柱选择。

HPLC 色谱柱的类型

市场上有多种类型的 HPLC 色谱柱,例如Merck一些最常用的类型是正相 HPLC 色谱柱、反相 HPLC 色谱柱、离子交换 HPLC 色谱柱、尺寸排阻 HPLC 色谱柱、亲和 HPLC 色谱柱等[1,2]这些 HPLC 色谱柱根据极性、孔径、亲和力和离子电荷来分离分析物。

虽然没有最适合所有分析物的单一色谱柱,但您需要知道哪种类型的 HPLC 色谱柱最适合您的分析物。例如,如果您计划分离有机化合物,与 NP-HPLC 相比,RP-HPLC 更合适。
想知道我们提供什么样的 HPLC 色谱柱?在“ HPLC 色谱柱类型”中了解更多信息。

HPLC色谱柱的长度和内径

根据色谱应用的不同,HPLC 色谱柱的长度不同,内径也不同。您可以控制 HPLC 色谱柱的色谱柱尺寸以提高分析的效率、灵敏度和速度。

不同长度不同内径的高效液相色谱柱

不同长度不同内径的高效液相色谱柱

除此之外,这种操作的另一个优点是最佳的溶剂消耗,从长远来看,这最终会节省成本。但是,请注意操作可能会导致高背压[3]因此,请明智地选择色谱柱长度和色谱柱直径。

因素 更窄的列 较短的列
增强的灵敏度  
样品要求低  
更短的分析时间  
低溶剂消耗和处置

HPLC 色谱柱的珠粒大小

固定相中的珠子通常为 2-10µm。较小的珠子可以提供更好的分辨率和更好的效率,但它的缺点是增加了背压[4]背后的原因是 HPLC 机器必须将流动相泵送通过密度更大的色谱柱。但是,对于超高效液相色谱 (UHPLC) 来说,情况就不同了。UHPLC 柱中使用的珠粒尺寸通常小于 HPLC 柱中的珠粒,因为 UHPLC 可以承受更高的背压。 

毛孔大小

较小的孔径将在色谱柱中具有较大的颗粒表面积。它会增加样品的保留时间,最终影响色谱性能[5]根据分析物的大小,建议使用不同孔径的 HPLC 色谱柱。现在市场上,有几家制造商生产不同孔径的HPLC色谱柱。您可以参考一般指南来选择孔径[6,7]

分子量 孔径 (Å)
<5,000 120
5,000 至 20,000 200
>20,000 300

结论

最后,选择最适合的 HPLC 色谱柱的关键是基于您的分析物/分子的性质。如果您了解您的分析物,我们建议您选择提供最佳峰的色谱柱。而在另一种情况下,如果您要筛选未知或不熟悉的分析物,则最好选择覆盖尽可能宽的选择性范围的 HPLC 色谱柱。不确定选择哪种 HPLC 色谱柱?联系我们获取更多信息。 


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